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    pk10有钱真的能赚钱:徕卡显微镜超分辨率gsdim显微镜

    2014-09-01  发布者:admin 

     纳米技术 GSDIM (其次个别分子返回枯竭显微镜) 提供详细图像蛋白质其他生物分子细胞空间布局。帮助研究实验室成像中心用户提供GSDIM 技术市场第一个商业系统 徕卡 SR GSD) 现在。利用超分辨率 GSDIM显微镜,细胞隔间地区,纤毛单一蛋白质,他们互动伙伴可以成像分辨率低于衍射极限,两位数纳米范围,使得科学家们更多了解细胞复杂相互作用。时间,方面的知识可能导致更好理解细胞以前无法治愈疾病原因。

    GSDIM 显微镜原理

    传统荧光显微镜荧光染料离域的 π 电子地面状态 S0 转移一种兴奋状态 S1。他们回到 S0 振荡,他们发出荧光。GSDIM 技术,降低了通过切换黑暗状态 (图 1) (Fölling et al.,2008 年,Bierwagen et al.2010年,种皮 et al.,2010年) 大部分荧光染料振荡周期涉及电子数目。减少了可激发荧光团数量,直到可以检测到分子。分子然后自发地黑暗状态返回一个易激动地面状态发出荧光,其他人通过切换黑暗状态再次停用。结果,荧光分子试样"作祟"。单个荧光团确切位置可以通过种算法确定。所有荧光团位置信息收集数千单独图像,坐标计算超分辨率 GSDIM 图像。GSDIM 图像所示结构因此起源方式类似流水账风格绘画。

     


     1: 基于一个简化雅布伦斯基 GSDIM 方法示意图。离域的 π 电子荧光团可以,例如,地面状态 S0,兴奋状态 S1 (既所谓国家) 三重态激进黑暗状态 (这两个 OFF 状态)。发出荧光,电子流通,地面兴奋状态。这些方面国家不同,关闭状态下的荧光团能够发出。这些 OFF 状态通常使用寿命,他们是很达到,由于国米系统过境所需。通过设置环境条件嵌入介质通过标准荧光免疫荧光聪明选择,可能可逆开关荧光团通过令人兴奋他们极端强度。足够分子关闭状态,可能检测样品个别分子。

     

     

     

     

     

    首要纤毛,非常规细胞器上皮细胞极性组织
    初级纤毛根尖表面极化上皮细胞,人体细胞基于 microtubuli 的结构。种形式 monocilia 发现,例如,种涂层、 、 上皮细胞。在这里他们发挥关键作用作为机械传感器 — — 例如,他们决定组成流体他们流动(Fliegauf ,2007年)。同时,他们参与维持细胞极性,梅丁达秘 (MDCK)细胞 (Bacallao ,1989年) 图所示。初级纤毛形成间期细胞周期等离子膜相关依据 250 毫微米叫做基底,轴丝形成结构 (Singla ,2006 年) 的基础上。基底身体基本框架包括九个微管二聚体 (9 + 0)。中心在这里,视为基体必要组成部分。这些蛋白质属于钙调素家庭,他们能够绑定Ca2 + EF 主题 (索尔兹伯里,2007年)。Ca2 + 绑定引起构象变化调节其他蛋白质微管蛋白半乳糖凝集素 3 中相互作用。四种不同类型小鼠有机体。金-2 -3 无所不在表示,积累中心粒 pericentriolar 地区基底身体单元格。金-1,另一方面,发现胚芽细胞视网膜,虽然金 4 发现完全分化细胞 (索尔兹伯里,2007年)。
     ciliogenesis 纤毛功能障碍各种疾病,视网膜变性、 多囊肾、 脑积水BBS (Bardet-Biedl 综合征) 原因。

     

    蛋白质组分基体超分辨成像
    徕卡SR GSD(大乐透专家杀号定胆系统,韦茨拉尔)是一个新的多用途的显微镜,不仅可用于超分辨率gsdim成像到20纳米的分辨率,同时也为TIRF显微镜(全内反射荧光)和高速宽视野的活细胞成像。这给了新的和非常详细的见解的根尖膜和蛋白质组成的结构。双染色Centrin-2与微管蛋白用免疫组织化学方法和成像技术的gsdim(图2A)。的微管网络下的顶膜可以清楚地可视化。其他可见的特点是半圆形的中央结构出现的每一次的细胞。设置在基体中,这些结构上还沾着Centrin-2。我们可以看到一个类似Centrin-2分布格局在此之前一样。图2b显示了一个双染结合伙伴Centrin-2 Galectin-3(科赫等人。,2010)。然而,传统的图像超分辨率图像提供了比gsdim弥漫性的蛋白质分配观。

    图2:超分辨率gsdim显微镜和激光共聚焦显微镜比较。A:gsdim显微镜(徕卡SR GSD),MDCK细胞培养在盖玻片,固定和染色anti-centrin-2 / A488和反α微管蛋白/ alexa647。在基体区微管蛋白和Centrin-2标签的半圆形结构(箭头)。规模:1µM。B:激光共聚焦显微镜(徕卡TCS SP2)扫描的顶端区域的MDCK细胞的免疫组化染色的anti-centrin-2 / A488和抗-galectin一3 / alexa546。核酸的细胞用Hoechst 33342染色。X / Y图像(上)再次显示了新月形的结构,也包含Centrin-2 Centrin-2的具有约束力的合作伙伴,Galectin-3(箭头)。X / Z图像清楚地显示这些结构位于顶部以上的细胞核。规模:1µM.

     

    Outlook
    GSDIM 技术产生下面衍射极限细胞结构显微成像技术进一步突破。样品制备方法,相同免疫组织化学方法用于建立大多数实验室衍射受限视场共聚焦显微镜。政府物料供应处显微镜可以显示已经看不见现在结构。可以提供更深洞察力基本过程细胞蛋白质合作伙伴互动,高度详细成像技术。将来,技术用于获取信息细胞原因以前无法医治疾病。

     



    沪公网安备 31011202003519号

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